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如何高效培養(yǎng)細胞——無菌環(huán)境的控制

更新時間:2022-12-09  |  點擊率:638

常見的細胞培養(yǎng)物污染主要分為化學污染與生物污染。

生物污染

細菌污染:

在生物污染中,細菌污染更為常見。特點就是:發(fā)生迅速、容易觀察。一般發(fā)生細菌污染后幾天內(nèi),就能肉眼觀察到;可肉眼觀察到培養(yǎng)物變渾濁,有時可觀察到明顯顆粒物,液體表面可能會形成一層薄膜。

真菌污染:

酵母菌、霉菌是真菌污染中常見的兩類。污染初期,培養(yǎng)基pH均不會有明顯變化,后期會伴隨pH的升高,培養(yǎng)物會變得混濁,顯微鏡下觀察,酵母菌污染會有橢球形或球形顆粒,而霉菌污染則能看到明顯菌絲。

支原體污染:

支原體非常小,光學顯微鏡下難以檢測,污染前期也很難看到明顯現(xiàn)象。當支原體密度高到一定程度后,會導致細胞培養(yǎng)物“變質(zhì)":pH驟變引起培養(yǎng)基快速變黃等。一些生長緩慢的支原體可在培養(yǎng)物中持續(xù)存活,而不會導致細胞死亡,但支原體污染的細胞,通常行為和代謝都會發(fā)生改變,進而影響實驗結(jié)果。

病毒污染:

病毒可以利用宿主細胞的結(jié)構(gòu)進行繁殖。體積小,檢測及祛除的難度都比較大。雖然大多數(shù)病毒對宿主的要求都比較嚴格,通常不會對宿主以外物種及細胞培養(yǎng)物產(chǎn)生不良影響,但對被病毒感染的細胞本身會產(chǎn)生比較大的威脅。因此,實驗時,要選擇來源正規(guī)的細胞株,實驗操作過程中,也要注意無菌操作,預防污染。

細胞交叉污染

不同細胞共同培養(yǎng)在一個培養(yǎng)皿內(nèi),就會形成交叉污染。需要通過合格的細胞購買渠道,以及嚴格規(guī)范的操作流程規(guī)避該問題。

化學污染

一些外源化學物質(zhì),如:用過的器具未清洗干凈,使用的添加劑純度不達標等等。都會對細胞產(chǎn)生或大或小的影響,此類影響可能抑制細胞生長,也可能加速細胞生長,但這些都是不可控的。

因此,在挑選試劑時,要購買在正規(guī)產(chǎn)品,盡量使用一次性滅菌器具,注意實驗操作規(guī)范。

創(chuàng)造無菌培養(yǎng)環(huán)境

細胞一旦發(fā)生污染,多數(shù)情況下都不可再繼續(xù)使用,即便是使用祛除試劑,也會造成不可避免的經(jīng)濟成本和時間成本。

因此,為細胞創(chuàng)造一個無菌環(huán)境就顯得尤為重要。對于環(huán)境的清潔、消毒、滅菌,以高效、便捷、安全為基本原則。

日常清潔可選用新捷爾滅這類試劑,定期(每周1-2次)對細胞培養(yǎng)室的墻壁、桌面、地面進行噴灑、擦拭處理,同時對細胞培養(yǎng)房間專用的實驗服等物品進行清洗、滅菌處理。

除此之外,推薦使用支原體祛除試劑,對實驗室環(huán)境進行定期維護。

產(chǎn)品特點

(1)快速有效

噴霧劑中含有支原體專用殺除劑Mynox®,可在幾分鐘內(nèi)迅速殺除支原體。

(2)廣譜抗菌

不僅能祛除支原體,而且能有效祛除葡萄球菌、腸球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、牛腹瀉病毒、腺病毒、多瘤病毒、鼠諾如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等。

(3)無腐蝕性和致癌性

乙醇作為溶劑,無腐蝕性和致癌性成分

(4)操作簡便

即用型消毒液,可以快速簡單地保持工作區(qū)的清潔干凈