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細胞復蘇有哪些注意事項

更新時間:2022-12-14  |  點擊率:697

細胞培養(yǎng)是指細胞在體外的培養(yǎng)技術(shù),即在無菌條件下,從機體中取出組織或細胞,模擬機體內(nèi)正常生理狀態(tài)下生存的基本條件,讓它在培養(yǎng)皿中繼續(xù)生存、生長和繁殖的方法。通過細胞培養(yǎng)我們可以獲得大量的、性狀相同的細胞,以便于研究細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、化學組成及功能和機制。

細胞真的很脆弱,就像小嬰兒一樣,需要你無微不至的關(guān)懷。

細胞培養(yǎng)的開始,就是復蘇細胞。如何有條不紊地讓細胞從沉睡中蘇醒?今天就來給大家總結(jié)幾個實用小技巧,快點來get!

細胞復蘇流程:

1、將凍存的細胞從液氮罐中取出,立即放入37°C的水浴中進行融化,輕柔晃動,加速融化,直到小瓶中只剩下一小塊冰,時長應控制在1min中;

2、用70%乙醇擦拭瓶外后轉(zhuǎn)移無菌操作臺中,打開瓶蓋前,用酒精燈火焰對瓶口進行消毒;

3、將預加熱的新鮮完quan培養(yǎng)基滴入小瓶中。緩慢用移液槍吸取瓶中液體至15ml離心管中,加入適量濃度和體積的完quan培養(yǎng)基,輕柔混合均勻;

4、200 × g左右細胞懸浮液離心5-10分鐘。實際的離心速度和持續(xù)時間因細胞類型而異。棄掉上清,加入新鮮完quan培養(yǎng)基重懸細胞,并將其轉(zhuǎn)移到適當?shù)呐囵B(yǎng)容器和推薦的培養(yǎng)環(huán)境中。

細胞解凍流程圖

注意事項:

1、液氮溫度低,小心低溫對人造成的傷害,在液相中儲存的冷凍瓶在解凍時存在爆炸的風險,因此,取出凍存管的時候,要做好個人防護。

2、通常細胞集中儲藏在液氮中,取出時應迅速,避免溫差對其他凍存細胞造成影響。

3、復蘇細胞的核心技術(shù),簡而言之就是快融,將在37°C水浴中快速解凍冷凍細胞(< 1分鐘。

4、解凍時,凍存管先放入無菌一次性PE手套中,再放入水中融化,避免污染也方便操作。

5、用預熱過的培養(yǎng)基慢慢稀釋解凍的細胞。

6、解凍細胞后,在培養(yǎng)皿中培養(yǎng)時,應盡量維持高密度,以提高細胞存活率。

7、注意無菌操作,避免細胞發(fā)生污染。

在細胞培養(yǎng)領域,一直有一款進口血清,被眾多實驗室、代理商認可的: 十數(shù)年來,品質(zhì)精良,質(zhì)量可靠,供貨有保障,性價比很高的進口血清,她的好口碑多來自于實驗室口口相傳,很多難養(yǎng)的細胞,一直對她情有獨鐘,她就是今天的主角,進口的Ausbian血清品牌,